普洱中農(nóng)藥多殘留檢測(cè)的固相萃取方法
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
（SuperClean GCB/NH2）
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法，GC-ECD 和 LC-MS/MS 作為分析方法，檢測(cè)普洱中的農(nóng)藥殘留水平。該方法操作簡(jiǎn)便，可簡(jiǎn)化樣品前處理過(guò)程，減少有機(jī)溶劑的使用。二、應(yīng)用范圍
本方法適用于茶葉中有機(jī)磷類、有機(jī)氯類、擬除蟲(chóng)菊酯類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定。
三、實(shí)驗(yàn)材料
NuAnalytical SuperClean GCB/NH2 固相萃取柱 500 mg/500 mg/6 mL。四、實(shí)驗(yàn)方法
1、樣品提取
稱取粉碎好的普洱 2 g(精確到 0.001 g)，加入 50 mL 離心管中，加入 10 mL 乙腈，劇烈振蕩 1 min，靜置 30min，4000 r/min 離心 5 min。上清液待凈化。
2、SPE 柱活化
GCB/NH2 固相萃取柱中加入約 2 cm 高無(wú)水硫酸鈉，使用前使用 10 mL 乙腈-甲苯(3:1，
v/v)活化。
3、上樣和洗脫
當(dāng)溶液液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入上述待凈化溶液 4 mL, 用雞心瓶接收流出液，逐步加入 25 mL 乙腈-甲苯(3:1，v/v)洗滌小柱，收集上述所有流出液于雞心瓶中。
4、重新溶解
流出液于 40 ℃水浴中旋蒸至 1 mL 左右，加入 2 mL 乙腈轉(zhuǎn)移至 10 mL 試管中，于40 ℃下氮?dú)獯蹈桑尤?1 mL 乙腈溶解殘?jiān)?/span>0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，分別供 GC-ECD 和LC-MS/MS 上機(jī)測(cè)試。
5、儀器條件
（1）、 GC-ECD 條件
氣相儀器：Agilent 7890A 色譜柱：FB-5, 30 m×0.32 mm, 0.25 μm
進(jìn)樣口溫度：220 ℃ 檢測(cè)器溫度：300 ℃
升溫程序：180 ℃(保持 2 min)；以 10 ℃/min 升溫到 230 ℃(保持 2 min)；以 2 ℃/min
升溫到 260 ℃(保持 2 min)；以 25 ℃/min 升溫到 270 ℃(保持 1.6 min)
載氣：氦氣 流速：1.6 mL/min 進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣（分流比 10:1）
（2）、LC-MS/MS 條件
質(zhì)譜儀：API 4000 色譜柱：SuperLu C18(2.0 mm×150 mm, 5 μm)
流動(dòng)相：A: 0.1%甲酸+10 mM 乙酸銨(1 mL 甲酸+0.77 g 乙酸銨溶于 1 L 水中)；B: 甲醇
洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：
時(shí)間/min
A(%)
B(%)
0.0
95
5
1.50
95
5
6.0
5
95
11.0
5
95
11.01
95
5
15
95
5
流速：0.35 mL/min 柱溫： 40 ℃ 進(jìn)樣體積：5 μL
離子源：電噴霧(ESI) 掃描模式：正離子模式 檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM) 質(zhì)譜儀離子源參數(shù)如下：
Source/Gas
Collision Gas (CAD)
6
Curtain Gas (CUR)
12
Ion Source Gas 1 (GS1)
50
Ion Source Gas 2 (GS2)
50
Ion Spray Voltage (IS)
5500
Temperature (TEM)
550
Interface Heater (IHE)
ON
氨基甲酸酯類農(nóng)藥各組分名稱、保留時(shí)間及母離子和子離子檢測(cè)離子對(duì)如下：
物質(zhì)名稱
保留時(shí)間/min
檢測(cè)離子對(duì)
DP
EP
CE
CXP
涕滅威
7.06
208.1＞89.1
208.1＞116
30
30
10
10
22
10
12
12
克百威
7.13
222.3＞123.1
222.3＞165.2
48
48
10
10
16
31
12
12
涕滅威砜
6.25
223.1＞86.2
223.1＞148.4
69
69
10
10
21
13
12
12
涕滅威亞砜
6.10
207.1＞132.2
207.1＞89.1
60
60
10
10
13
22
12
12
啶蟲(chóng)脒
6.83
223.4＞126.1
223.4＞90
70
70
10
10
29
46
12
12
五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、普洱中農(nóng)藥多殘留的添加回收結(jié)果
表 1 0.25 mg/kg 普洱中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥多殘留的添加回收結(jié)果
回收率（%）
名稱
平均回收率（%）
RSD (%)
1
2
3
乙烯菌核利
84.5
76.0
80.0
80.2
5.30
腐霉利
110.5
102.0
105.0
105.8
4.07
異菌脲
112.0
107.5
119.0
112.8
5.14
聯(lián)苯菊酯
94.5
87.5
90.5
90.8
3.87
甲氰菊酯
109.5
100.0
106.5
105.3
4.61
高效氟氯氰菊酯
84.0
79.5
82.5
82.0
2.79
氟氯氰菊酯
86.5
86.8
94.1
89.1
4.83
氟氰戊菊酯
120.5
114.0
120
119.2
3.06
氰戊菊酯
95.5
85.0
92.9
91.1
6.00
氟胺氰菊酯
70.4
72.75
81.0
74.7
7.45
表 1 0.05 mg/kg 普洱中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的添加回收結(jié)果
回收率（%）
名稱
平均回收率（%）
RSD (%)
1
2
3
涕滅威
95.6
87.2
90.0
90.9
4.70
克百威
84.4
78.0
82.2
81.5
3.99
涕滅威砜
77.4
83.0
81.4
80.6
3.58
涕滅威亞砜
70.0
74.4
75.2
73.1
3.73
啶蟲(chóng)脒
82.4
94.0
88.4
88.3
6.57
2、普洱中農(nóng)藥多殘留檢測(cè)色譜圖
圖 1 添加水平為 0.25 mg/kg 普洱中有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)色譜圖
圖 2 添加水平為 0.0625 mg/kg 普洱中氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)色譜圖
