流動相中加入適量四氫呋喃（THF），主要是為了調節洗脫能力、改變選擇性、改善峰形或溶解性。它不是所有方法都需要加，一般是在甲醇/乙腈體系分離效果不理想時，用來“微調”方法。

1. 增強流動相洗脫能力

THF 是一種有機溶劑，反相 HPLC 中洗脫能力通常較強。

在反相色譜中，常見有機相洗脫強度大致可理解為：

THF > 乙腈 > 甲醇

加入少量 THF 后，可以使疏水性較強的化合物更容易被洗脫出來，表現為：

保留時間縮短；

后出峰更快洗脫；

分析時間縮短；

強保留雜質不容易長期滯留在柱上。

例如某些疏水性藥物、芳香族化合物、脂溶性雜質，用甲醇或乙腈洗脫太慢時，少量 THF 可以明顯改善。

2. 改變選擇性，提高分離度

THF 不只是“更強的有機相”，它的溶劑性質和甲醇、乙腈不同，因此會改變化合物在固定相和流動相之間的分配行為。

它可能影響：

芳香環化合物的保留；

疏水相互作用；

偶極相互作用；

π-π 作用；

氫鍵相關作用；

某些異構體或結構相近雜質的相對保留。

所以加入 THF 后，有時會出現：

原來重疊的兩個峰分開；

峰順序發生變化；

某些雜質峰與主峰分離度提高；

原來乙腈/水、甲醇/水體系分不開的雜質變得可分。

這也是方法開發中加入 THF 最重要的原因之一：改變選擇性，而不僅僅是縮短保留時間。

3. 改善峰形

某些化合物在常規流動相中可能出現：

拖尾；

峰寬；

峰分裂；

保留過強；

柱上吸附；

溶解性不足導致峰形異常。

加入少量 THF 有時可以改善這些問題，尤其是對一些：

疏水性強的化合物；

芳香性強的化合物；

容易與固定相發生較強相互作用的化合物；

在甲醇/乙腈體系中溶解性不好的樣品。

不過峰形改善并不一定總是發生，有些體系中 THF 也可能導致峰形變差，需要實驗驗證。

4. 改善樣品或雜質的溶解性

THF 對很多有機化合物溶解能力較強，尤其是一些疏水性、脂溶性或聚合物相關物質。

加入 THF 后可能有助于：

防止樣品析出；

減少柱頭沉積；

改善進樣重復性；

洗脫強吸附雜質；

提高疏水雜質回收率。

但樣品溶劑中 THF 含量過高時，也可能因為溶劑強度太大導致峰前伸或變寬，所以進樣溶劑還要與初始流動相匹配。

5. 降低某些流動相體系的黏度和柱壓

與甲醇相比，THF/水體系在某些比例下黏度較低，可能降低柱壓。

但實際柱壓還與比例、溫度、柱子規格有關，不能簡單認為加 THF 一定降壓。

6. 常見加入比例

THF 通常不是大量加入，而是作為第三有機溶劑少量使用。

常見比例例如：

1%；

2%；

3%；

5%；

10%。

很多方法中只是加入 少量 THF 來調節選擇性，例如：

乙腈-水-THF

甲醇-水-THF

緩沖鹽水溶液-乙腈-THF

具體比例要通過分離度、保留時間、柱壓和峰形來優化。

7. 使用 THF 的注意事項

1. UV 截止波長較高

THF 的 UV 截止波長大約在 212 nm 左右，且不同品質、穩定劑和氧化程度會影響背景吸收。

如果檢測波長很低，例如：

200 nm；

205 nm；

210 nm；

使用 THF 可能導致：

基線噪聲升高；

背景吸收增加；

梯度洗脫時基線漂移；

靈敏度下降。

所以低波長 UV 檢測時要謹慎。

2. 容易氧化生成過氧化物

THF 長時間接觸空氣和光照，可能形成過氧化物，存在安全隱患，也可能影響基線和柱壽命。

因此應注意：

使用 HPLC 級 THF；

避光保存；

開瓶后盡快使用；

不使用長期存放、顏色異常或來源不明的 THF；

必要時檢測過氧化物。

3. 對某些材料不兼容

THF 對部分塑料、密封件、管路材料有溶脹或溶解作用。

使用前要確認系統兼容性，尤其是：

PEEK 管路；

某些密封圈；

某些塑料接頭；

某些在線過濾器材質。

一般不銹鋼系統更耐受，但仍應查看儀器和柱子的說明書。

4. 不是所有色譜柱都適合 THF

多數普通硅膠基 C18 柱可以短期或適量使用 THF，但仍應看說明書。

特別要注意：

手性柱，尤其涂覆型多糖手性柱，THF 可能破壞涂覆層；

聚合物基質柱，溶脹風險不同；

SEC/GPC 柱，溶劑兼容性必須嚴格匹配；

氨基柱、特殊鍵合相柱，也要查兼容性。

5. 與鹽類緩沖液混合時要防止析鹽

THF 與高鹽水相混合時，可能改變鹽的溶解度。若緩沖鹽濃度較高，可能出現：

析鹽；

篩板堵塞；

柱壓升高；

管路堵塞。

所以加入 THF 的體系中，緩沖鹽濃度不宜太高，流動相配好后應觀察是否澄清，必要時過濾。

8. 簡單總結

流動相中加入適量 THF，主要作用是：

增強洗脫能力，縮短強保留化合物的保留時間；

改變色譜選擇性，提高某些相近雜質或異構體的分離度；

改善疏水性化合物的峰形和溶解性；

幫助洗脫強吸附或脂溶性雜質。

但 THF 也有缺點：低波長背景吸收較高、易氧化、對部分材料和特殊色譜柱不兼容、可能導致析鹽或基線漂移。因此它通常作為方法優化中的輔助有機相，比例不宜盲目增加，最好結合柱說明書和系統兼容性來使用。